J. Jonah Jameson foi criado pela mãe, Betty Jameson, e pelo padrasto David, um oficial do Exército condecorado como herói de guerra, mas que em casa era abusivo com a esposa e o enteado. Essa experiência fez com que Jameson crescesse convencido de que "ninguém é herói todos os dias da semana" e que "até os verdadeiros heróis não conseguem manter isso o tempo todo". Durante o colégio, desenvolveu interesses por boxe e fotografia, conhecendo sua primeira esposa, Joan, no clube de fotografia da escola. Após se casarem logo depois de formados, Jameson começou sua carreira no jornalismo como repórter freelancer no Daily Bugle ainda no ensino médio.
Anos depois, adquiriu o Daily Bugle, que enfrentava dificuldades financeiras, usando recursos próprios e uma herança. Tornou-se publisher e editor-chefe, revitalizando o formato do jornal. Em 1968, transferiu a sede para o Goodman Building, em Manhattan, que passou a ser conhecido como o edifício do Daily Bugle. Sua esposa Joan foi assassinada por um homem mascarado quando seu filho John ainda era criança — um trauma que contribuiu para sua posterior cruzada contra heróis mascarados.
Jameson ganhou notoriedade por seus editoriais contra heróis fantasiados em geral, mas especialmente contra o Homem-Aranha. Quando o herói salvou a vida de seu filho John, que estava numa cápsula espacial em órbita com problemas, Jameson acusou publicamente o Homem-Aranha de ter sabotado a nave para depois resgatá-la como um golpe publicitário. Pouco depois, contratou um jovem fotógrafo chamado Peter Parker para vender fotos do Homem-Aranha, sem imaginar que se tratava da mesma pessoa.
Apesar de se apresentar como um defensor dos direitos civis e de se opor publicamente ao crime organizado e ao preconceito contra minorias e mutantes, Jameson nutria uma obsessão em destruir a reputação do Homem-Aranha. Financiou a criação de diversos inimigos para o herói, como o Escorpião (transformando um homem por meio de experimentos científicos), os primeiros robôs Caçadores de Aranhas criados por Spencer Smythe, e chegou a contratar o Mysterio para derrotá-lo. Embora ordenasse a criação desses equipamentos e aliados, Jameson nunca teve intenção de matar o Homem-Aranha — apenas de capturá-lo e desmascará-lo.
Quando o Duende Verde tentou chantageá-lo expondo sua responsabilidade pela criação do Escorpião, Jameson revelou sua culpa publicamente e renunciou ao cargo de editor-chefe, passando-o a Joseph "Robbie" Robertson, embora tenha mantido o cargo de publisher e continuado atuante na operação do jornal. Mais tarde, sob ameaças contra sua família, foi forçado a vender o jornal para Norman Osborn, mas reconquistou a propriedade após Osborn ser afastado.
Com o tempo, casou-se com a cientista Marla Madison, que o ajudou a construir outro Caçador de Aranhas, e os dois adotaram a sobrinha de Marla, Mattie Franklin — que secretamente era a Mulher-Aranha. Durante um período, foi dado como morto em um acidente de carro orquestrado por Mysterio, que o fez passar por uma encenação do Inferno, até ser resgatado pelo Homem-Aranha.
Quando Peter Parker revelou publicamente ser o Homem-Aranha durante a Guerra Civil dos super-heróis, Jameson desmaiou ao descobrir que o homem que ele chamava de ameaça esteve em sua folha de pagamento por anos. Sentindo-se traído — pois sempre vira Peter como "o último homem honesto" e um filho adotivo —, Jameson processou o antigo funcionário por fraude, exigindo de volta todo o dinheiro pago pelas fotos ao longo dos anos. Porém, o governo concedeu anistia a Parker pelos atos cometidos para proteger sua identidade secreta, frustrando os planos de Jameson.
Quando Peter fez um pacto com Mefisto para reverter a revelação pública de sua identidade, Jameson voltou a ignorar que Parker e o Homem-Aranha eram a mesma pessoa. Enfrentando dificuldades financeiras no jornal, acabou perdendo o controle do Daily Bugle para o empresário Dexter Bennett. Após um período de recuperação de problemas de saúde, Jameson ingressou na política e foi eleito prefeito de Nova York. Durante seu mandato, enfrentou uma invasão de Caçadores de Aranhas comandados por Alistaire Smythe, que resultou na morte de sua esposa Marla, que se sacrificou para salvá-lo.
Após o período em que Otto Octavius assumiu o corpo de Peter Parker e passou a atuar como Homem-Aranha, Jameson finalmente passou a reconhecer o herói como uma figura heroica. Contudo, quando descobriu que o herói havia assumido o controle da penitenciária Ilha Ryker, sua desconfiança voltou, e ele encomendou uma nova série de Caçadores de Aranhas à Alchemax. O escândalo envolvendo esses robôs e a invasão da Nação Goblin acabou levando à sua aposentadoria política em desgraça.
Fora da prefeitura, Jameson trabalhou brevemente no canal Fact Channel, onde foi apresentado a uma versão reanimada de sua falecida esposa Marla, criada por uma empresa fraudulenta de clonagem chamada New U Technologies. Quando a empresa entrou em colapso e os clones se degradaram, Jameson perdeu a esposa pela segunda vez e foi demitido do canal.
Sem perspectiva, passou a despejar seu ódio pelo Homem-Aranha em um blog chamado Threats & Menaces. Durante uma investigação sobre uma divisão secreta da S.H.I.E.L.D., Jameson acabou recebendo uma entrevista exclusiva com o Homem-Aranha, e durante o encontro, Peter Parker revelou sua identidade secreta para ele. A partir de então, Jameson começou uma jornada para reparar a reputação do herói que ele passou anos destruindo, primeiro em um programa de rádio chamado Get to Work! e depois em um podcast.
Ele também começou a confrontar as consequências de seu ódio: quando o novo Grande Chefe da Máfia foi revelado como o filho do original, que havia sido destruído em parte pelas mentiras que Jameson espalhou sobre o Homem-Aranha, Jameson percebeu o estrago que sua obsessão causou a vidas inocentes. Desde então, passou a apoiar ativamente o Homem-Aranha, ajudando-o em diversas situações e mantendo uma relação complexa, mas transformada, com o herói que um dia jurou destruir.